En los últimos años, el control de los residuos de pesticidas, veterinarios y otros agentes contaminantes en productos acuícolas ha sido más riguroso debido al incremento de consumo per cápita de productos marinos a nivel mundial, por esta razón la Food and drugs administration (FDA) solicita métodos de ensayo para la determinación y control de éstos agentes contaminantes. La presente investigación está enfocada en el desarrollo y validación de un método de ensayo para la determinación de pesticidas benzoilúreas en matrices de pescado Trucha arcoíris y Langostino por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas triple cuadrupolo, utilizando un equipo Waters ACQUITY I-CLASS XEVO TQ-XS. El desarrollo de la metodología consistió en la extracción del Diflubenzuron y Teflubenzuron utilizando Acetonitrilo y una extracción sólida en fase dispersa con amina primaria secundaria (PSA), C18 y NaCl, obteniendo porcentajes de recuperación aceptables dentro del criterio propuesto por el documento N SANTE 12682/2019. Así mismo, la validación del método según la Directriz para la validación de métodos de ensayo DA-acr-20D de la NTP ISO/IEC 17025:2017 se llevó a cabo mediante 10 parámetros de validación de Selectividad/Especificidad, límite de detección, límite de cuantificación, linealidad, rango de trabajo, veracidad, precisión en términos de repetibilidad intermedia, robustez e incertidumbre, logrando demostrar estadísticamente que el método cumple con todos los parámetros de validación mencionados y que los resultados emitidos son confiables, veraces y precisos.